黑曲霉因其优异的蛋白分泌能力和良好的安全性被广泛应用于酶制剂工业发酵，也逐步用于异源蛋白表达。然而，其表达的异源蛋白常受胞外蛋白酶降解，导致表达水平偏低。因此，构建具备低背景表达和高分泌能力的黑曲霉底盘菌株，已成为丝状真菌异源蛋白表达系统的研究热点。

近期，中国科学院天津工业生物技术研究所田朝光研究员带领的真菌合成生物学研究组，以糖化酶高产工业菌种黑曲霉AnN1为出发株，构建了低背景表达的底盘宿主菌株AnN2。在低背景底盘基础上，通过进一步利用强启动子、高效分泌信号肽，并敲除主要胞外蛋白酶基因PepA等策略，进一步优化了表达系统，有效提升了异源蛋白的稳定性与分泌效率。为验证表达系统性能，团队选取了多个来自不同宿主、不同类型的蛋白进行了表达测试（灵芝免疫蛋白LZ-8、葡萄糖氧化酶GoxM、果胶裂解酶MtPlyA及磷酸果糖异构酶TPI等），均实现了目标蛋白多拷贝定点整合至糖化酶高表达位点，获得稳定重组菌株。所有目标蛋白均可在发酵培养48小时内从上清中纯化获得，实现了从构建到纯化的快速闭环，显著缩短生产周期。本研究建立了一个集底盘菌株改造、表达元件优化与分泌通路增强于一体的表达体系，初步构建了黑曲霉异源蛋白高效表达系统。

该研究工作得到国家重点研发计划、中国科学院战略性先导科技专项等项目的支持，相关研究成果发表于Microbial Cell Factories期刊，已申请国家发明专利1件。中国科学院天津工业生物技术研究所联合培养硕士生苟福凡和博士后刘丹丹为论文共同第一作者，田朝光研究员和刘倩副研究员为论文共同通讯作者。

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基于高表达位点多拷贝整合的黑曲霉异源蛋白表达平台构建