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重组黑曲霉发酵生产蛋白酶K技术
  发布时间:2015-07-18    供稿部门:产业合作部

  项目概况 

  由真菌(林伯氏白色念球菌,Tritirachium album Limber)产生的蛋白酶K,是一种枯草蛋白酶类的高活性,切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,用于生物样品中蛋白质的一般降解。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNARNA制备中的核酸酶。主要用于基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNARNA制备中的核酸酶,也可以用于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。蛋白酶K1989年在细菌中成功表达并投入市场。  

  此项目新开发出来由黑曲霉生产的蛋白酶K。其蛋白酶K是分泌型,主要产于胞外,因此纯化过程简单,成本较低。 

  市场前景 

  初步估计蛋白酶K市场已超过百万美元。目前中国市场上大部分蛋白酶K都是来源于国外,最主要的是MerckRocheFermentasAmresco,其中RocheFermentas是用毕赤酵母表达的蛋白酶K(专利号: US 7,368,274)。国外价格在500-600元左右/100mg (5000/)。国内进口蛋白酶K每克售价在3000元到4000元。目前国内有一家公司(金普诺安蛋白质工程技术(北京)有限公司)针对蛋白酶K基因进行了突变并在毕赤酵母中成功表达。 

  技术特点 

  本项目构建了高效表达蛋白酶K的工程菌株,获得的蛋白酶K的酶活已达到>4000单位/毫升(福林法),蛋白量接近1/(蛋白质电泳胶),目前已经申请专利1项。 

  投资与效益分析 

  目前,纯化后的蛋白酶K国外市场价格每100mg 500-600 (5000/),本项目蛋白酶K的发酵成本低于20/克,提纯成本预计为100/克,总成本将低于300/克。 

  目标客户为MerckRocheFermentassigma和国内基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒等公司。 

  发布及更新时间    

  201412 

  联系电话 

  022-84861990 

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